Qu'est-ce que western blot ?

Le western blot, également connu sous le nom d'immunoblot, est une technique couramment utilisée en biologie moléculaire et en biologie des protéines. Cette technique permet de détecter spécifiquement des protéines dans un échantillon donné.

Le western blot est basé sur plusieurs étapes clés. Tout d'abord, les protéines présentes dans l'échantillon sont séparées par électrophorèse sur gel selon leur poids moléculaire. Le gel est ensuite transféré sur une membrane (généralement en nitrocellulose ou en PVDF), qui capturera les protéines. Ce transfert est réalisé par électrotransfert, où un courant électrique est appliqué pour pousser les protéines à travers le gel et les déposer sur la membrane.

Une fois les protéines transférées sur la membrane, celle-ci est bloquée pour éviter toute interaction non spécifique avec les anticorps. Ensuite, la membrane est incubée avec un anticorps primaire spécifique de la protéine d'intérêt. Cet anticorps se lie spécifiquement à la protéine recherchée.

Après l'incubation avec l'anticorps primaire, la membrane est lavée pour éliminer les anticorps non liés. Ensuite, un anticorps secondaire marqué avec une enzyme (comme la peroxydase de raifort ou la phosphatase alcaline) est ajouté à la membrane. Cet anticorps secondaire se lie à l'anticorps primaire et amplifie le signal de la protéine d'intérêt.

Enfin, une réaction chimique se produit, générant un signal détectable sur la membrane. Ce signal peut être visualisé en utilisant différentes méthodes, telles que la chromatographie colorée, la luminescence ou la fluorescence.

Le western blot est couramment utilisé en recherche biomédicale pour détecter et quantifier des protéines spécifiques. Il permet d'étudier l'expression des protéines, les interactions entre protéines, la phosphorylation et d'autres modifications post-traductionnelles. Le western blot est une technique polyvalente et sensible, mais elle nécessite une manipulation précise des échantillons et une validation soigneuse des résultats obtenus.

Catégories